LA FÉCONDATION IN VITRO
Que se passe-t-il au laboratoire ?
J0 : LE JOUR DE LA PONCTION OVOCYTAIRE
A) Les ovocytes
Dès la ponction, les liquides folliculaires sont apportés au laboratoire. Les ovocytes sont recherchés sous une loupe. Ils sont ensuite transférés dans un tube ou une boîte de culture contenant un milieu nutritif. Chaque ovocyte est placé dans un incubateur à 37°C et dans des conditions de culture optimales.
Environ une heure aprs l'arrivée du liquide de ponction au laboratoire, on peut connaître le nombre d'ovocytes recueillis. Il est en moyenne de 10 par ponction mais varie énormément, de 0 (1% des cas) à beaucoup plus ; les recueils supérieurs à 15 sont tout de même assez rares (5% des cas) et ceux supérieurs à 20 sont exceptionnels (1,5% des cas).
B) Les spermatozoïdes
Dans le cas où le prélèvement de spermatozoïdes doit s'effectuer par ponction dans le testicule ou l'épididyme, l'intervention peut se faire en même temps que la ponction (ponction synchrone), ou bien avant et dans ce cas les spermatozoïdes auront été congelés.
Dans certains cas, on sera amené à utiliser des spermatozoïdes issus de paillettes d'autoconservation (spermatozoïdes du conjoint congelés par exemple avant un traitement capable d'induite une stérilité comme une chimiothérapie) ou de donneur (FIVD ou FIV avec donneur) ; les spermatozoïdes peuvent enfin être recueillis dans les urines, en cas d'éjaculation rétrograde (éjaculation vers la vessie en cas par exemple de paralysie).
La fécondation qui débute par l'union d'un spermatozoïde avec l'ovocyte et s'achève par la réunion des chromosomes maternels et paternels dure au moins une dizaine d'heures ; ce n'est donc pas un instant mais toute une cascade d'évènements cellulcaies, dépendants les uns des autres. Elle se déroule sans l'intervention du biologiste.
ovocyte entouré de spermatozoïdes
♦ Cas où une micro-injection ovocytaire est réalisée (ICSI ou IMSI) : les ovocytes sont débarrassés des cellules qui les entourent ; puis la fécondation par micro-injection est réalisée grâce à l'aide d'un appareil de micromanipulation. L'ovocyte est maintenu grâce à une pipette pendant qu'un spermatozoïde est injecté dans l'ovocyte. L'ovocyte est ensuite immédiatement mis en culture.
Cette technique ne nécessite qu'un petit nombre de spermatozoïdes vivants; qu'ils soient mobiles ou non, théoriquement autant qu'il y a d'ovocytes à injecter.
En cas d'IMSI, on choisit un spermatozoïde grâce à un microscope à très fort grossissement (6600 fois contre 400 fois pour une analyse classique) et on procède ensuite à une micro-injection classique.
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J1 : LE 1er JOUR APRÈS LA PONCTION
S'il y a eu fécondation, on peut voir le noyau mâle issu du spermatozoïde et le noyau femelle, issu de l'ovocyte, au centre de l'œuf : c'est le stade des 2 pronucléi ou pronoyaux, encore appelé zygote.
J2 : LE 2ème JOUR APRÈS LA PONCTION
A J2 les embryons présentent 2 à 4 cellules, à J3 6 à 8 cellules ; à J5-J6 ils forment une cavité, c'est le stade de blastocyste.
Les embryons seront soit transférés à J2 ou J3, soit au stade de blastocyste. La culture jusqu'au stade de blastocyste implique l'utilisation de milieux spécifiques, dits milieux séquentiels.
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L'analyse de l'aspect morphologique des embryons permet de les classer en 4 stades, en fonction de différents paramètres : nombre de cellules, régularité des cellules, présence de fragments. Les plus viables sont dits "top qualité".